| 摘要目的:Contactinhibition在維持角膜內皮細胞的不分裂狀態下扮演了一個非常重要的腳色.Proteintyrosinephosphatases(PTPs)在維持”胞與細胞的接觸:cell-cellcontacts”,細胞的分化和生長上也是非常重要的. 在這個計畫中,我們計畫評估是否phosphatases在整個角膜內皮細胞分裂功能上的contact-dependentinhibition過程中有其重要的影響力。我們試圖評估角膜內皮細胞中表達了哪些類別的PTP,並且研究哪些PTP牽涉在contactinhibition的機能當中.方法:我們事先培養老鼠角膜內皮細胞達到confluent的狀態,之後再針對這些細胞施以廣泛性的phosphataseinhibitor,sodiumorthovanadate(SOV).之後我們利用免疫染色Immunocytochemistry(ICC)來偵測施以SOV治療之後的角膜內皮細胞其cell-cellcontacts相關蛋白質,例如ZO-1及??-catenin的表現。之後我們再評估是否在這樣的處理之下,細胞將進入分裂狀態（利用Ki67來偵測）.之後,利用ICC,RT-PCR,及西方點墨法來測試各種PTPs,例如PTP-mu,PTP-LAR,PTP-1B,SHP-1,SHP-2,andPTEN的表達.結果:免疫染色法證實SOV可引發細胞由cell-cellcontacts的狀態中釋放而出,並且促進細胞分裂.PTP-mu,PTP-1B,SHP-1,SHP-2,及PTEN,而非PTP-LAR,在角膜內皮細胞中都有表達.細胞中表達的位置,PTP-mu及PTP1B在subconfluent或confluent狀態有不同的表達位置。然而SHP-1,SHP-2,及PTEN的表達位置則與是否confluent無關.西方點墨法證實了PTP-1B,SHP-1,SHP-2,及PTEN的表達.RT-PCR證實了PTPmumRNA在角膜內細胞的表達.結論:Phosphatases在cell-celljunctions及細胞分裂上扮演重要的腳色.PTP-mu,PTP1B,SHP-1,SHP-2及PTEN在ratcornealendothelium有表達,並且牽涉在contactinhibition的機轉之上。 |