| 綠茶多酚具有許多的益處,包括抗氧化能力、保護心血管功能、清除自由基、降低血脂及抗癌等功效,另外在缺血再灌流(ischemia/reperfusion,IR)動物模式下證實綠茶多酚可以有效的調節NF-κB、AP-1轉錄因子的變化以及降低STAT-1活化。最近的研究報告也指出：在缺血再灌流的心臟,綠茶多酚可以降低胞內鈣離子超載負荷(Ca2+overload)引發心肌不整脈(ventriculararrhythmias)產生的危險傷害。這篇研究報告也證實：綠茶多酚可能是經由細胞膜上特定區域─脂肪筏(lipidraft),影響細胞膜上的蛋白接受體的訊號傳遞；因而影響其細胞膜上的黏附性(adherensjunctionalproteins)和間隙蛋白(gapjunctionalproteins)的胞內分佈與表現量,終使心肌細胞內部免於缺血再灌流的傷害。本研究計畫的目的：想要利用缺血再灌流培養心臟細胞(H9c2cardiomyoblast)模式來探討綠茶多酚經由活化細胞膜上的訊息傳遞後,細胞內產生變化的相關路徑。首先將先量化綠茶多酚影響缺血再灌流的H9c2心臟細胞內的鈣離子濃度變化與細胞存活率；再藉由西方墨點法(westernblot)以及免液染色法(immunofluorescenestain)來觀察細胞黏附性蛋白及間隙蛋白表現量的變化。另外,H9c2心臟細胞也將轉染(transfection)綠螢光蛋白(Enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)基因,以作為探測缺血再灌流對H9c2心臟細胞產生的傷害以及綠茶多酚保護心臟細胞的作用。轉染EGFP基因的H9c2心臟細胞將分別在缺血再灌流之前後之後加入有效劑量的綠茶多酚,藉由螢光釋放光譜(Emissionfluorescencespectra)來量化綠茶多酚作用在細胞產生的影響。作用機制的探討將利用免疫共同沉澱(Immuno-Co-precipitation)的方法來分析與胞內EGFP蛋白形成的相關作用的複合物免疫沉澱萃取下來,再經由西方墨點法來辨識綠茶多酚如何透過細胞膜上的訊息傳遞訊號傳至細胞內特定的標的蛋白(targetproteins)以有效地保護心臟細胞免於缺血再灌流的傷害。 |